Diabetologia：激活但功能损伤的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现肾脏自身HIV到再次出现1标准型白血病药理学腹泻的实质性率在儿童初期就有良好的描绘出，多个肾脏自身HIV乙型肝炎的儿童中会有70%在血清匹配后10年内罹患白血病，而随访15年的儿童这一比率减小到84%。相比较来说之下，占药理学1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的得病机制还没有得到更进一步的分析。

越来越多的人开始常用分期子系统来判别1标准型白血病的实质性：个锥体在再次出现多种肾脏自身HIV时进到第1前期，再次出现血糖精神状态时进到第2前期，再次出现腹泻时进到第3前期。一些多发肾脏自身HIV乙型肝炎的个锥体，在1期和2期，实质性较更为慢，并发展为得病的1标准型白血病。我们之前描绘出了三第三组在首次探测到多种肾脏自身HIV抽取后至少10年无白血病的近乎更为慢实质性者，这第三组病变人数少，但相似性并不一致。随后，我们断定肾脏自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞内质子化当在实质性更为更为慢的病变中会也就是说不存在，但在近期得病和长期存在的白血病病变中会很并不容易探测到。这可能断定，与实质性病变相比较来说，这些病变胃溃疡子系统的平衡大幅提高。

早期分析断定，尽管平衡性T细胞内(Treg)数量正常，但白血病病变存在一些子系统缺陷，其中会都有对IL-2的质子化当潜能下降。此外，白血病病变中会的effectCD4+T细胞内可能对平衡愈来愈具抵抗性，表现为effectT细胞内的抑止弱化，自然现象产生的Treg和排泄产生的作用于Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞内中会IL-2质子化当弱化。本分析的目标是描绘出了CD4+平衡性T细胞内(Treg)在一小群近乎更为更为慢实质性者中会的相似性，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以这群人为基础的横向分析，在21岁以下确诊的病变家庭成员中会检查1标准型白血病的危险因素。我们之前描绘出了长期更为更为慢实质性者的相似性，他们保持多重肾脏自身HIV乙型肝炎超过10年，但没有再次出现白血病的药理学腹泻，更为慢性或非顺利完成性胃溃疡。随后，10名在此之后保持无白血病并希望提供大量血液抽取的更为更为慢实质性者扩及T和B细胞内子系统分析。在在此之前的分析中会，8名更为慢实质性者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肾脏自身HIV乙型肝炎。所有的行动者都处于1标准型白血病实质性的1期，尽管一些人随后丧失了肾脏自身HIV对某些淋巴细胞的乙型肝炎质子化当，然而，一名病变已经处于2期至少6年，但没有再次出现药理学腹泻，一名病变被诊断为白血病，该患者72岁，在搜集实验抽取时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在分析中会对该小分子顺利完成了单独分析报告。分离外周血单个连锁质子化细胞内(PBMCs)，采行多参数流式细胞内精和T细胞内抑止鉴别分析报告小分子中会Treg的频谱、表标准型和子系统。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)顺利完成无监理聚类分析，分析报告Treg表标准型。

结果：与肥胖症小分子相比较来说，来自更为慢实质性锥体的失忆CD4+T细胞内的监理聚类结果显示，激活着的失忆CD4+ Treg频谱减小，与糖皮质激素作用于的TNFR无关复合物(GITR)表述减小有关。一名HbA1c增高的病变与实质性更为更为慢者和冗余的印证第三组相比较来说，Treg谱有所多种不同。子系统分析断定，与肥胖症小分子相比较来说，来自更为更为慢实质性锥体的Treg诱导的CD4+effectT细胞内抑止相比较来说受损。表现为对effectCD4+T细胞内CD25和CD134表述的抑止减小。

所示1 深入的表标准型分析结果显示，CD4+Treg亚标准型在更为慢实质性配置文件中会减小。由FlowSOM转化的Treg室，汇聚在来自所有小分子的活着CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物表述鉴别出10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个多种不同Treg标识转化的10个元簇的MST。每个路由器代表人一个炮兵部队(100个炮兵部队)，愈来愈大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器第三组周围上色。每个路由器中会的饼所示透露单个标识的表述级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整锥体标识表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较总质量为每个metacluster箱内本站所示(总质量> 0.05%)未确定为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。红色圆圈代表人捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴别。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频谱的减小是实质性更为更为慢的标志。分级暂时性(a - f)和柑桔分析(g-k)更为SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成分离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及小分子SP 606(红色)中会CD25+ cd127的频谱汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性同构的箱内本站所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，记号突出的簇被辨别为SP和HD配置文件间的多种不同。(j)箱内本站所示结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比较总质量(比率)。(k)直方所示结果显示每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标识相比较表述与文化背景表述(深蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。文化背景与所有其他簇中会标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴别

所示3 与肥胖症献血者相比较来说，实质性更为更为慢者失忆treg的GITR减小。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述标识的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热所示(sp606不都有在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述串连，结果显示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和鉴别，p< 0.07(红色)所有小分子都有，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和冗余的HD不都有在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)串连，结果显示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩鉴别

所示4 来自更为更为慢实质性的CD4+ treg细胞内控制effectCD4+T细胞内的潜能下降。SP第三组用深蓝色的本站和圆圈透露，HD第三组用金色的本站和圆圈透露，红色的本站/圆圈透露小分子sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(应当答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活着化细胞内，指导3天内顺利完成流式细胞内精探测。(a-d)与CD4+应当答者相比较应当的treg指导(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。常用乙型肝炎印证(激活着的号召细胞内不含treg)推算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

所示5 effectCD4+T细胞内对更为更为慢实质性的T细胞内活着化的抑止愈来愈尖锐。SP第三组用深蓝色的本站和圆圈透露，HD第三组用金色的本站和圆圈透露，红色的本站/圆圈透露小分子sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标识，treg按观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活着化细胞内，指导3天内顺利完成流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

假设：我们得出的假设是，来自更为更为慢实质性子的活着化失忆CD4+Treg在GITR表述中会得到了扩展和丰富，强调了进一步分析Treg在1标准型白血病风险个锥体中会的异质性的更进一步。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28