Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢地扩展

从第一次再次出现去甲自身复合物到再次出现1型式冠心病诊断症状的方面部将在婴幼儿一时期就有良好的叙述，多个去甲自身复合物非典型的婴幼儿中的有70%在血液转换后10年中患上冠心病，而随访15年的婴幼儿这一比部将上升到84%。相较之下，占诊断1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的发病有助于还没有赢取合理的研究课题。

越来越多的人开始常用分期系统来度量1型式冠心病的方面：变异在再次出现多种去甲自身复合物时进入第1阶段，再次出现高血压异常时进入第2阶段，再次出现症状时进入第3阶段。一些多发去甲自身复合物非典型的变异，在1期和2期，方面较更慢，并蓬勃发展为发病的1型式冠心病。我们以后叙述了一小组在首次测定到多种去甲自身复合物检验后至多于10年无冠心病的太快方面者，这小组症状000人多于，但特征非常明确。随后，我们见到去甲自身复合物特异性CD8+T细胞内反应将在方面平稳的症状中的基本不存有，但在近期发病和长期存有的冠心病症状中的很容易测定到。这显然断定，与方面症状相较，这些症状化脓性反应将的抑制弱化。

早期研究课题断定，尽管抑制性T细胞内(Treg)数量情况下，但冠心病症状存有一些机能缺陷，其中的包括对IL-2的反应将能力下降。此外，冠心病症状中的的震荡CD4+T细胞内显然对抑制更具抵抗性，表现为震荡T细胞内的抑制作用减弱，纯净显现出的Treg和体外显现出的正向Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞内中的IL-2反应将减弱。本研究课题的目的是叙述了CD4+抑制性T细胞内(Treg)在在在极平稳方面者中的的特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的交叉研究课题，在21岁以下出院的症状亲属中的检查1型式冠心病的致命因素。我们以后叙述了长期平稳方面者的特征，他们保持稳定多重去甲自身复合物非典型超过10年，但没有再次出现冠心病的诊断症状，更慢性或非完成性化脓性。随后，10名继续保持稳定无冠心病并想提供大量肝脏检验的平稳方面者不属于T和B细胞内机能比对。在现在的研究课题中的，8名更慢方面者(SP小组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的去甲自身复合物非典型。所有的参加者都保持稳定1型式冠心病方面的1期，尽管一些人随后一落千丈了去甲自身复合物对某些复合物的非典型反应将，然而，一名症状仍然保持稳定2期至多于6年，但没有再次出现诊断症状，一名症状被诊断为冠心病，该实验者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该小分子完成了单独指标。剥离外周血单个核细胞内(PBMCs)，引入多模板流式细胞内妖术和T细胞内抑制作用试验指标小分子中的Treg的频部将、遗传基因和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)完成无统筹聚类比对，指标Treg遗传基因。

结果：与肥胖症小分子相较，来自更慢方面体的知觉CD4+T细胞内的统筹聚类结果显示，启动时的知觉CD4+ Treg频部将上升，与止痛药正向的TNFR相关亚基(GITR)理解上升有关。一名HbA1c升高的症状与方面平稳者和匹配的对照小组相较，Treg明人有所各不相同。机能比对断定，与肥胖症小分子相较，来自平稳方面体的Treg介导的CD4+震荡T细胞内抑制作用明显受损。表现为对震荡CD4+T细胞内CD25和CD134理解的抑制作用上升。

平面图1 系统地的遗传基因比对结果显示，CD4+Treg亚型式在更慢方面路由表中的上升。由FlowSOM转化成的Treg楼内，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物理解深入研究出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个各不相同Treg标有转化成的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在节点小组周围手工。每个节点中的的饼平面图回应将单个标有的理解层级。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整体标有理解。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下同位素为每个metacluster箱新线平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP小组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。紫色圆圈代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 常用CITRUS的预测模型式证实，Treg频部将的上升是方面平稳的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表者性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR理解完成剥离，模拟器FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(布氏)小组以及小分子SP 606(紫色)中的CD25+ cd127的频部将核心内容平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度上色，箭头出彩的簇被识别为SP和HD路由表错综复杂的各不相同。(j)箱新线平面图结果显示了在SP(布氏)和HD(灰点)小组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比之下同位素(比部将)。(k)直方平面图结果显示每个簇的遗传基因(蓝色)和Treg标有相比之下理解与文化背景理解(红色);上列，寄存器Treg_3;后面一行，寄存器Treg_4。文化背景与所有其他簇中的标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

平面图3 与肥胖症献血者相较，方面平稳者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的理解热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR理解联结，结果显示直方平面图(c)和核心内容平面图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(紫色)所有小分子包括，p< 0.05(红色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)联结，结果显示直方平面图(e)和核心内容平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

平面图4 来自平稳方面的CD4+ treg细胞内控制震荡CD4+T细胞内的能力下降。SP小组用红色的新线和圆圈回应将，HD小组用白色的新线和圆圈回应将，紫色的新线/圆圈回应将小分子sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按观察的比部将反应物。用抗CD3 /28微珠增生细胞内，指导3天后完成流式细胞内妖术测定。(a-d)与CD4+此番者相比之下应将的treg指导(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。常用非典型对照(启动时的积极响应将细胞内不含treg)算出抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡CD4+T细胞内对平稳方面的T细胞内增生的抑制作用更敏感。SP小组用红色的新线和圆圈回应将，HD小组用白色的新线和圆圈回应将，紫色的新线/圆圈回应将小分子sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按观察的比部将反应物。用抗CD3 /28微珠增生细胞内，指导3天后完成流式细胞内妖术(CD25反染)和细胞内因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同指导。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自平稳方面子的增生知觉CD4+Treg在GITR理解中的赢取了扩展到和多样化，忽视了进一步研究课题Treg在1型式冠心病安全性变异中的的异质性的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28